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PCR-SSO分型方法使用最广的上海亲子鉴定HLA-DNA分型技术

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二)PCR-SSO分型方法

1.斑点杂交(Dot-Blot)将PCR扩增片段制成斑点,用等位基因特异性寡核

苷酸探针(alleles-specific oligonucleotide probe,ASO)杂交,通过探针放射自显影

结果进行HLA分型。此后,又出现了把探针预先固定在膜上,标记PCR引物的

反向斑点杂交(reverse dot-blot,RDB)技术。斑点杂交和厦向斑点杂交PCR产物

分析都是PCR-SSO技术(图9-9)i实践证明.PCR-SSO是一种特异性强、结果稳

定可靠的方法。

2.PCR-微最滴度板杂交法(PCR-MPH)  PCR-微量滴度板杂交法(PCR-mi-

crOtiter plate hybridization,PCR-MPH)是将Ss0探针杂交检测转移到微量滴度

板上完成,这种上海亲子鉴定方法与酶联免疫吸附试验( ELISA)十分槲似。先用一对带有生物

索标记的引物对某- HLA基阕座进行扩增.等位基I因序列特异性探针则预先同

相化在微量滴度板孔中,P CR产物在孔中与探针发生特异性杂交,杂交产物带有

生物素而能与亲和索结合,通过亲和豢所带酶的底物反应显色,最终显示特异性杂

交结果。同样,也可将PCR产物结合到板孔中,再用型特异探针杂交。由于微孔

板的结构优势,这两种方法均可同步对大批样品进行分型检测。

生物紊、地高辛等非同位索标记及化学发光姓示技术的发展,使得PCR-SSO

成为今天使用最广的HLA-DNA分型技术。

(三》PCR-SSP上海亲子鉴定分型方法

序列特异性引物PCR (PCR-sequence-specific  primers, PCR-SSP)根据等位基

因的序列,设计具有序列特异性的引物,对样本进行DNA分型。该方法是以引物